1、Q：rh Annexin V R-PE 20 tests是BD公司用于凋亡流式檢測的試劑盒，產品顯示種屬為人，請問能否用于大鼠細胞的檢測？

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A：可以。因為Annexin V是與PS親和，而PS在不同種屬間應該沒差異。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V進行熒光素（FITC）標記，以標記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。

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2、Q：用流式作細胞凋亡為什么跟tunel差別那么大啊？？tunel測出來的細胞凋亡率大概有30%而作流式測出來的凋亡率只有2%（陰性對照0.5%）差別好大啊，用的是beckman公司的Annexin V /PI雙染試劑盒，實驗步驟如下：

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（1）胰酶消化貼壁細胞，加培養基中止，離心1000轉5min

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（2）吸去上清，PBS0.5ml 重懸細胞（因為要送到別處作流式，期間路程約1h，戶外溫度約37度）

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（3）然后加入Annexin V /PI各5微升，避光20min，上機。

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請問這是什么原因導致的？

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A：我也用這兩種方法做過凋亡，是存在兩種方法測的凋亡率差別有點大，但還沒有大到你這樣的程度。雙染測的是凋亡的早期事件PS外翻。TUNEL測的是凋亡最晚期的事件DNA片段化。而且TUNEL在檢測過程中，把操作損傷細胞和壞死細胞當作了凋亡細胞，而且如果TUNEL是肉眼計數的話，也會有判斷上的誤差，所以，往往TUNEL作出來的凋亡率高一點。但如果凋亡率達到30%，ladder估計也應該跑的出來。雙染雖然是機器操作，但在調試補償時，人為的影響還是挺明顯的，也不是特別的客觀。基線稍微左移，你的凋亡率就成倍上升。所以，給你的建議是在經費、時間允許的范圍內再多做幾次吧。感覺這么大的差異，可能這兩種方法都會存在問題。還有，去流式的路上，裝細胞的ep管最好插在冰上，拿著冰盒。

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3、Q：可以用液氮保存瘤組織塊，然后再做流式細胞分析嗎？

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A：我認為是不能的。因為流式細胞分析要求細胞分散、單個，活性好，這樣才能區分死亡、凋亡和活性細胞。組織在凍存、復溫的過程中會有大量的細胞死亡，同時經過這一過程的組織在分離成單個細胞的時候會形成許多細胞碎片，不宜上流式檢測了，所以用于流式檢測的標本最好是新鮮標本，即取材后立即檢測，效果最好。

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我以前也試圖將組織存入-80℃，然后進行流式檢測，結果發現后來處理的組織細胞不是粘團就是破碎，根本無法檢測。如果你實在找不到可以檢測的流式細胞儀，我建議你可以將組織標本進行切片，然后做原位染色，觀察組織細胞的凋亡。

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我們實驗室的腫瘤組織塊一部分凍存于液氮用于以后提蛋白做Western或提RNA做RT-PCR，另一部分用10%的甲醛固定用于以后做免疫組化。

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來源：51xxziyuan.com

總結

以上是生活随笔為你收集整理的流式细胞凋亡检测实验常见问题解析的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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