（1）運用分子生物學技術，人工設計并合成一個庫容量為1015-1018的隨機寡核苷酸文庫，在特定的緩沖液體系和適宜的溫度下（一般為20-35℃）與靶分子混合孵育，形成靶標-核酸適體復合物；（2）通過濾膜過濾、親和層析、磁珠分離、毛細管電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等特定方法分離結合與未結合靶標的核酸序列；（3）反篩選與靶分子結合的核酸序列，以排除掉非特異性結合的核酸序列；（4）對獲得的特異性結合靶標的核酸序列進行PCR擴增生成次級文庫，與原靶標分子進入下一輪篩選。（5）對篩選得到的核酸適體進行克隆和測序，并進行生物活性、識別位點與分子結構（一級結構和二級結構）分析，與靶分子特異性強、親和力高的核酸適體即可用于各種研究工作。

核酸適體篩選技術的篩選步驟主要包括:①利用分子生物學技術構建人工合成的單鏈隨機寡核苷酸文庫,其隨機序列長度為20～100個堿基;②將靶點分子與隨機寡核苷酸文庫一起溫育,保留與之結合的寡核苷酸;③結合PCR體外擴增技術,經過多輪篩選,使能與靶點分子特異結合的寡核苷酸序列得到富集,最終篩選得到核酸適體。

總結

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