克隆基因定位法是怎样一种技术?
生活随笔
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克隆基因定位法是怎样一种技术?
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習慣上,人們用克隆表示由同一物種具有相同基因型的兩個或多個個體組成的群體?;蚨ㄎ豢寺』驁D位克?。╩ap-based cloning)是用于分離其編碼產物尚不知道的目的基因的一種有效的方法。具體的步驟是先將目的基因,亦即目的基因的突變定位到染色體上,并在目的基因的兩側確定一對緊密連鎖的RFLP或RAPD分子標記;接著利用最緊密連鎖的一對兩側分子標記作探針,通過染色體步移技術將位于這兩個分子標記之間的含目的基因的特定的片段克隆并分離出來;最后是根據其同突變體發生遺傳互補的能力從此克隆中鑒定出目的基因。成功地應用基因定位技術分離目的基因的一個必要條件是,以酵母人工染色體YAC(yeast artificial chromosome)為載體構建含有大片段DNA的YAC庫。另一個必要的條件是要有可用的同目的的基因緊密連鎖的DNA探針。
克隆基因定位法是用已克隆基因的cDNA探針與保留在雜種細胞內的人染色體DNA順序進行分子雜交,來確定克隆基因所在的染色體位置的方法。如要定位人體白蛋白基因,首先以人體白蛋白基因cDNA為探針,分別與經過Hind III酶切后的人體細胞和中國倉鼠卵巢細胞(CHO)DNA雜交,雜交后的人體細胞DNA顯示6.8 kb帶型,CHO細胞的DNA顯示3.5 kb帶型。
克隆基因定位法是用已克隆基因的cDNA探針與保留在雜種細胞內的人染色體DNA順序進行分子雜交,來確定克隆基因所在的染色體位置的方法。如要定位人體白蛋白基因,首先以人體白蛋白基因cDNA為探針,分別與經過Hind III酶切后的人體細胞和中國倉鼠卵巢細胞(CHO)DNA雜交,雜交后的人體細胞DNA顯示6.8 kb帶型,CHO細胞的DNA顯示3.5 kb帶型。
總結
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