單堿基延伸法基本原理與直接測序方法相同,從本質(zhì)上講是測SNP位點一個堿基的序列,所以也被稱作Mini-Sequencing。該方法目前已經(jīng)在多種儀器平臺上得到應(yīng)用,包括:毛細(xì)管DNA測序儀,飛行時間質(zhì)譜儀,偏振光酶標(biāo)儀。該方法的優(yōu)點是可以允許3-10個SNP位點在一個反應(yīng)管中分型,從而降低了分析成本。缺點是實驗步驟與測序一樣多,在做多重分析時往往成功率降低,需要優(yōu)化條件。通量是每天2萬-20萬個分型。

樓主所說的單堿基延伸法，是ABI公司的SNaPshot方法，原理類似于Sanger測序法，我們首先通過特異性的PCR富集出包含目的SNP的目標(biāo)片段，純化完引物，單鏈核苷酸后，進(jìn)行延伸反應(yīng)，SNaPshot Kit中含有許多熒光標(biāo)記的ddNTP，我們設(shè)計出一條緊挨著SNP位點的延伸引物，這樣在反應(yīng)中，他只會延伸出一個堿基（ddNTP會終止延伸反應(yīng)），這樣延伸出的單鏈核苷酸片段帶有了熒光，在毛細(xì)管電泳中可以在對應(yīng)的位置出現(xiàn)對應(yīng)的顏色峰，純合子就是一道峰，而雜合子則是兩個峰。

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的有了解SNPs的基因分型方法中的单碱基延伸法的么？的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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