不同的建库方法以及不同的实验室操作对RNA-Seq结果有何影响?与microarray相比吻合性如何?
生活随笔
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不同的建库方法以及不同的实验室操作对RNA-Seq结果有何影响?与microarray相比吻合性如何?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
可以讀一下這篇文章 Multi-platform assessment of transcriptome profiling using RNA-seq in the ABRF next-generation sequencing studyhttp://www.nature.com/nbt/jour ... .html簡單的說就是測量基因表達量時,差異不是很大;對于splice junction and variant detection,差異比較大。RNA-Seq和microarry的吻合性很多人都做過,基本上都說相關性很高。比如這篇文章The concordance between RNA-seq and microarray data depends on chemical treatment and transcript abundancehttp://www.nature.com/nbt/jour ... .html
樓上提供了文獻,我就根據之前的經驗簡單說下吧:RNA-seq建庫時一般有個步驟會比較讓人糾結,就是拿到cDNA片段的過程,是將mRNA全長直接打斷片段化以后再反轉錄,還是將mRNA全長反轉錄后再打斷比較好,從實際可操作性上來說,一般大部分會選擇前者,因為可實踐性更好,如果直接針對全長mRNA進行反轉錄,很難拿到均一的全長cDNA,很多時候最終測到的結果會有相對比較明顯的3’端或5‘端偏向性,這對于后期的分析是會有影響的。
樓上提供了文獻,我就根據之前的經驗簡單說下吧:RNA-seq建庫時一般有個步驟會比較讓人糾結,就是拿到cDNA片段的過程,是將mRNA全長直接打斷片段化以后再反轉錄,還是將mRNA全長反轉錄后再打斷比較好,從實際可操作性上來說,一般大部分會選擇前者,因為可實踐性更好,如果直接針對全長mRNA進行反轉錄,很難拿到均一的全長cDNA,很多時候最終測到的結果會有相對比較明顯的3’端或5‘端偏向性,這對于后期的分析是會有影響的。
總結
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