【RPA】号称代替PCR的PRA是什么技术?
生活随笔
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【RPA】号称代替PCR的PRA是什么技术?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
RPA是一種專利技術,其利用重組酶,用于擴增任何一種生物標本的核酸,具有很高的分析敏感性和特異性。RPA是通過反向寡聚核苷酸引物定位到模板DNA以及在DNA聚合酶的延伸,獲得了特定DNA段的等溫擴增。RPA的關鍵是動態反應環境的建立,即重組酶—引物復合體的形成和解聚達到一種動態的平衡,和PCR相比,RPA證明具有很高的粗提樣品耐受性,建議可以在現場實地測試無需核酸提取時使用。
大概看了一些文章之后發現:實際上兩者之間的差別沒有想象中那么大。一般,常規PCR必須經過變性、退火、延伸三個步驟,而PCR儀本質上就是一個控制溫度升降的設備。RPA反應的最適溫度在37°C-42°C之間,無需變性,在常溫下即可進行。,也就是溫度變化。而起決定性作用的是酶,RPA技術主要依賴于三種酶:能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,最佳反應溫度在37°C左右。技術的原理如下:重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成,對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合,防止進一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快,一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。
大概看了一些文章之后發現:實際上兩者之間的差別沒有想象中那么大。一般,常規PCR必須經過變性、退火、延伸三個步驟,而PCR儀本質上就是一個控制溫度升降的設備。RPA反應的最適溫度在37°C-42°C之間,無需變性,在常溫下即可進行。,也就是溫度變化。而起決定性作用的是酶,RPA技術主要依賴于三種酶:能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,最佳反應溫度在37°C左右。技術的原理如下:重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成,對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合,防止進一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快,一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。
總結
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