實時定量RT-PCR是在普通PCR反應中加入能與PCR產物結合的熒光探針或熒光染料,使之熒光信號隨著擴增產物的增加而成比例增長,儀器實時檢測每一個循環結束后的熒光強度,通過與標準曲線對比得出定量結果。可以直接檢測目的基因的起始數量,從而動態監測融合基因水平。從擴增到產物分析都是閉管操作,最大限度避免了污染,無PCR后處理。SYB RgreenⅠ是一種能與雙鏈DNA結合的熒光染料,游離時幾乎沒有熒光信號,本底很低。PCR進行過程中,它能結合到擴增產物雙鏈DNA的小溝中,熒光強度大大增強。

總結

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