120kV
200kV

操作面板

• 左面板
  • α tilt、β tilt（僅雙傾桿可用）
  • Track ball：beam shift
    • +/-調節移動步長
  • Intensity：順時針旋轉→光斑大小↑光強↓
  • Stigmator：像散矯正器，一般不用操作面板而用UI軟件-tune調節
  • 多功能X：按軟件中定義起作用
  • L1～L3：定義后作用，默認——
    • L1：reset focus，定義正焦的focus值用
    • L3：spot size +
• 右
  • Dark field：切換明場/暗場成像，暗場一般不用
  • 多功能Y
  • Diffraction：物鏡光闌插入時，將成像模式切換到衍射模式，可用于調節光闌對中
  • Focus：調（物鏡）焦
    • 大旋鈕：調節step，一般2/3/4
    • 小旋鈕：調focus
  • Wobbler：抖動，不常用
  • Eucentric focus：調節電鏡光路前恢復物鏡默認值，使樣品位于eucentric height下聚焦
  • 樣品桿：調整樣品臺的相對x/y軸位置
    • +/-調節移動步長
  • z axis：調整樣品臺的相對z軸位置（調eucentric height用）
  • Magnification：放大倍數
  • R1～R3：定義后作用，默認——
    • R1：抬/放熒光屏
    • R2：set defocus
    • R3：spot size -

軟件面板及信息欄

• UI：電鏡的主控制軟件（左電腦的左、右上、右下三窗口）
  • 信息欄
    • HT=high tension高壓值
    • 放大模式：LM—M—SA（最常用）
    • defocus數值
    • exposure time：與intensity/spot size相關，一般1.0+
    • spot size：常用2/3，D1319默認4不改，數字↑光斑尺寸↑光強↓
  • 下拉選項窗
    • stigmator
    • direct alignment：勿動gun
    • vacuum map：亮藍=高真空，深藍=同外界
    • none=收起窗口
• DM=Digital ???：外插的拍照用軟件
• TIA：電鏡自帶的拍照用軟件
• DM、TIA一般選其一打開即可，同時打開時DM容易卡死

上樣前檢查

• 登記本*2
• 進樣孔指示燈不亮紅（故障/cryo-cycle）
• 收起物鏡光闌
• （info賬號登陸）
• UI
  • log中是否有報錯
  • setup-vaccum
    • gun<20
    • col.<20，可能出現<40亦可，過后會抽低
    • 右擴展窗high tension、DM按鈕未啟動（灰色）
  • setup-high tension
  • camera右擴展窗：shutter選第二項
  • search-右擴展-control-“reset holder”
• 液氮：確定無異常后可加，加滿冷阱瓶，小心沸騰

上樣

• 確認已reset holder
• 進樣插桿抽真空時長設置：setup-vacuum-右擴展-settings
  • ??普桿60s/冷桿90s
• 裝載grid
  • ??旋轉180度輕拍玻璃筒，檢查grid是否會掉出
  • 進樣時樣品正面（碳膜黑色面）朝下
• 側面pin對準進樣通道右下白線，插入至插不動
• Airlock啟動，啟動倒計時抽真空
• Airlock完畢燈亮，迅速逆時針轉動樣品桿至轉不動、背面短針對準下方小孔（??轉動中勿前后插）
• column內真空將樣品桿帶入（??用左手緩沖）
• 確認真空值正常

啟動

• （UI）setup-high tension：120kV、固定啟動時間30s
• 點亮“high tension”啟動高壓
  • 電場引起emission突升，等待恢復穩定～0
• “Filament”加熱燈絲
  • emission=燈絲電流，等待趨于穩定
• 兩次電鏡使用間HT、Filament可能不關，關Col. Valve即可

調光

??按部件由上到下

• 關燈、R1放下熒光屏
• 打開柱閥：點滅Col. Valve close
• ?“eucentric focus”物鏡歸零、確認已撤物鏡光闌（左進右出，上樣前檢查）
• 光線對準熒光屏中心
  • 首先降低“magnification”至SA模式，SA無光則繼續降低至低倍<1000x找到光斑
  • track ball+“Intensity”調整光路位置
  • 無光？
    • 降低magnification
    • “Intensity”順時針放大/逆時針縮小光斑、判斷光軸位置
    • 更換樣品區域
• 調整聚光鏡像散：光斑是否為圓形？
  • “Intensity”調整光斑至易于觀察大小
  • UI下拉選項窗stigmator→“condenser”模式
  • 多功能X/Y調整光斑形狀
  • 后續隨時可調
• 調整聚光鏡光闌：光斑是否同心收縮？=光闌是否與光路同軸？
  • “Intensity”逆時針縮小光斑至最小，對準熒光屏中心
  • “Intensity”順時針放大光斑，可能有偏移
  • 光闌小旋鈕，使大光斑對準中心
    • 大旋鈕=光闌孔徑，聚光鏡固定=4
    • 光闌下方撥片=插拔光闌，左進右出，聚光鏡固定插入
  • “Intensity”縮放光斑確認同心收縮
• 調樣品臺同心高度/eucentric height
  • 放大倍數4000～6000x
  • 光斑散開滿屏
  • 選擇特異參照物
  • set alpha=15→“Z axis”→0→樣品操縱桿→循環至位移最小
    • 首次位移過大則關閉set alpha、設置為5重新進行
  • ??更換square/grid需重新操作
• 合軸粗調：低倍9000～10000x下合軸
  • 調整beam tilt、beam shift、rotation centre：操作見下
  • 劉濤版本→一般沒有必要分低高倍調兩次，rotation centre可以在定義正焦前、低倍下調一次
• 合軸細調：高倍>20000x/拍照倍數下合軸
  • 聚光鏡像散可忽略
  • 定義正焦
    • 根據樣品情況減小光強e.g.spot size 2，exposure 1.0+差不多亮度即可
    • 預覽模式
      • （DM）“insert camera”→“start view”：設置參數刷新1s，bin4
      • （TIA）“search”
    • 調出FFT模式：“LiveFFT”
      • thon ring橢圓則需調整物鏡像散：UI下拉選項窗stigmator→objective模式→多功能X/Y調整thon ring形狀（對應FFT圖像20°/60°方向）
      • “focus”順時針旋轉時thon ring變大則為欠焦狀態，反之為過焦
      • 調整“focus”至最外圈thon ring放大鋪滿→“(L1/R2=)reset focus”定義正焦
    • 退出相機預覽
      • （DM）“stop view”→R1放屏
      • （TIA）點滅“search”“LiveFFT”→R1放屏
      • 調整光斑大小至適合合軸
  • UI下拉選項窗“Direct alignment”-“beam tilt ppX&Y”：多功能XY+track ball直至晃動的兩光斑重合，done
  • UI下拉選項窗“Direct alignment”-“beam shift”：多功能XY+“Intensity”將光斑拖至中心，done
    • ??不能用track ball拖光斑
    • 切換到beam shift后看不到光斑時，先減小“Magnification”及“Intensity”縮小并找到光斑，再多功能鍵XY拖至中央，逐步提回高倍操作
  • UI下拉選項窗“Direct alignment”-rotation centre
    • 樣品操縱桿使視野對準碳膜邊緣
    • 多功能XY+track ball使光斑、視野振動均最小（類似心臟跳動），done
• 插入物鏡光闌：物鏡后焦面，屏蔽高角散射、非彈性散射，提高像的襯度
  • 光斑散開滿屏
  • “Diffraction”進入衍射模式
  • “Magnification”調整參數D=～680nm（類似于放大倍數？）
  • 多功能XY調整rings對準中心
  • 物鏡光闌下撥片向左插入光闌（??用手緩沖）
    • 大旋鈕調光闌孔徑=4
  • 物鏡光闌正、側小旋鈕調整光斑對準中心
  • “Diffraction”取消衍射模式

圖像觀察、拍照

• 熒光屏上確認放大倍數及樣品位置
• R1抬起熒光屏
• 重調物鏡像散、定義正焦：插入物鏡光闌的影響，操作同上
  • ??更換square/grid需重新操作
• DM拍攝：
  • “start view”拍攝模式預覽
  • “focus”微調欠焦使圖像清晰
    • 一般defocus=-3～-2，根據樣品決定
    • process-live-FFT下觀察thon rings更便于調整
  • “stop view”停止預覽
  • “acquire”拍攝：exposure=1.0
  • 保存圖像
    • 直接關閉照片窗口→提示保存，僅tif或dm3格式
    • 選中窗口→“file”選項卡→“save d…”，可保存jpg格式
    • 錘子按鈕→global …→save numbered …→選中照片窗口→123按鈕=自動編號并保存
    • ??路徑E/，每人每日更新
• TIA拍攝：
  • （UI）search-camera-“start view”
  • 保存圖像
    • Auto save
    • 右鍵“fi?? data”，可保存為jpg等格式

下樣

• 調低“Magnification”=1150x
• “Intensity”光斑散開
• search-右擴展-control-“reset holder”、清空track
• 關閉柱閥：點亮Col. Valve close
• 關閉“Filament”
  • 先登記filament emission
• 蓋上熒光屏玻璃板蓋，開燈
• 取出樣品桿（??掉真空）
  • 拔出至不動→順時針轉至不動→拔出桿（??保持垂直、穩定速度）
• 登記本記錄各電鏡參數
• 當天最后使用：setup-vacuum-右擴展-“cryo cycle”，4～8h
  • 注意第二天最早預約的時間段

總結

以上是生活随笔為你收集整理的负染电镜操作的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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