摘要 根系細菌在發揮抑制土傳病害上發揮著重要作用，這種復合益生菌群能有效增強對病害的抗性。本文中作者介紹了 Pseudomonas 類群并且評價了他們對番茄病原菌 Ralstonia solanacearum的抗性效果。本文作者提出了通過不同的益生菌群來抑制病原菌的新機制。用益生菌替代農藥來拮抗病原菌是一個非常有前景的方向。然而，我們應該選擇多少以及哪一種微生物來發揮作用，目前還不是很清楚。研究表明了增加益生菌群落多樣性能通過增強對營養物質的競爭來抑制病原菌。 本文作者結合溫室實驗和互補實驗來研究促進植物生長的 Pseudomonas群落對病害抑制作用的機制以及其多樣性的重要性。八種不同的產DAPG的 Pseudomonas的物種被用于本實驗。選擇他們的依據是很多研究表明他們能廣泛的抑制病菌，并且廣泛存在與根圍中。作者使用簡單的原位實驗來定量假單胞菌類群與拮抗類群的關系。為了縮小實驗室與真實環境的差距，作者評估了不同假單胞菌類群在高度多樣性的番茄根圍類型中的生存能力。 在接種假單胞菌類群之后，番茄的病癥以及發病等級都顯著的降低，然而只有當接種了8中假單胞菌的比接種單一的效果好10倍。 實驗設計： 作者選取了8種不同的假單胞菌用于實驗，所有菌株都保存在-80度的20%甘油中，使用時隨機選取一個單克隆，在LB培養基上過夜生長，然后早0.85的NaCl溶液中洗三次，并且用分光光度計在600nm的吸光值在取0.5的讀數。作者使用Ralstonia solanacearum 作為測試病原菌，該病原菌是從中國南京分離的。作者用這8種菌創造了48中不同的組合，包括含有1,2,4,8種菌的組合。在不同的組合中，保證所有菌的總濃度一定，菌的種類越多，單菌的濃度越低。為了把細菌多樣性和抗性聯系起來，作者使用了番茄根系分泌的單碳作為碳源，細菌在胰蛋白胨大豆肉湯培養基中過夜生長（1 L：胰蛋白胨15g；大豆蛋白胨：5g；NaCl：5g ），然后4000轉，離心3分鐘，在0.85%鹽中洗三次，然后在96孔板的OS基本培養基中加入10nM的氨基酸，有機酸，蔗糖，最后吸光度為600nm, 0.05。作者進行了一個長達50天的種植實驗，當幼苗長出3片真葉進行移植，生長10天后移植到含5x107次方假單胞菌的土中。在接種假單胞菌5天后再在土中加入106次方的病原菌R. solanacearum。每天都記錄病情發展情況，分別在5,15,25,35天測定病原菌的濃度，具體做法是在每個采樣時間點從每一個處理中，移除兩株隨機選擇的一個有重復的幼苗塊植株。去除表面可見的土壤，干冰運回實驗室，保存在-80度中。用qPCR鑒定B2BF (5=-ACCCAC CGC AGC ATC GTT TAT GAG C-3=) and B2BR3 (5=-AGC AGA GCG ACG AGA ACT CCA GGG A-3=) targeting the phlD 基因來定量假單胞菌濃度。用基因(forward,5=-GAA CGC CAA CGG TGC GAA CT-3=; reverse, 5=-GGC GGC CTTCAG GGA GGT C-3=) targeting the fliC 定量病原菌濃度。

參考文獻 Hu, J., Wei, Z., Friman, V. P., Gu, S. H., Wang, X. F., Eisenhauer, N., ... & Jousset, A. (2016). Probiotic diversity enhances rhizosphere microbiome function and plant disease suppression. MBio, 7(6), e01790-16

總結

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