概述：tophat是以bowtie2為核心的一款比對軟件。

tophat工作分兩步：

1.將reads用bowtie比對到參考基因組上。

2.將unmapped-reads打斷成更小的fragments，比對到參考基因組上，如果比對成功，建立剪切點。

用法：tophat [options]* <index_base> <reads1_1[,…,readsN_1]> [reads1_2,…readsN_2]

<index_base>：參考基因組的index文件的具體目錄，例如，index文件存放在當(dāng)前目錄下的index文件夾，文件的名字是hg19.*.*, index數(shù)據(jù)的文件應(yīng)該是：./index/hg19，不用寫到./index/hg19.*.*。參考基因組應(yīng)該和index文件放在同一目錄中。

reads：PE reads必須放在不同的兩個文件中，文件名必須按照*_1, *_2的規(guī)范成對出現(xiàn)。如：A.reads1_1.fastq B.reads1_1.fastq A.reads1_2.fastq B.reads1_2fastq

常用options:

-o | –output default: ./tophat_out輸出的文件夾路徑。

-r |--mate-inner-dist default: 50成對的reads之間的平均inner距離。例如：fragments長度300bp，reads長度50bp，則其inner距離為200bp，該值該設(shè)為200。

–mate-std-dev default:20inner距離的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

-a | --min-anchor-length default: 8read的錨定長度：該參數(shù)能設(shè)定的最小值為3；錨定在junction兩邊的reads長度只有都大于此值，才能用于junction的驗證。

--library-typeTophat處理的reads具有鏈特異性。比對結(jié)果中將會有個XS標(biāo)簽。一般Illumina數(shù)據(jù)的library-type為 fr-unstranded。

-G | –GTF提供基因模型的注釋文件，GTF 2.2 或者 GFF 3 格式的文件。如果設(shè)置了該參數(shù)，Tophat 則先提取出轉(zhuǎn)錄子序列，然后使用Bowtie2將reads比對到提取的轉(zhuǎn)錄組中；只有不能比對上 的reads再比對到genome；比對上的reads再打斷轉(zhuǎn)變成genomic mappings；再融合新 的mappings和junctions作為最后的輸出。值得注意的是GTF/GFF文件代表chromosome和contig的第一列要和bowtie index中的 參考序列名一致。

參考文章：
http://blog.sina.com.cn/s/blog_8808cae20101amqp.html

總結(jié)

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